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荧光显微镜和普通显微镜的区别
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北京长恒荣创科技

时间 : 2021-02-05 18:11 浏览量 : 40

    光学显微镜:是利用光学原理,把人眼所不能分辨的微小物体放大成像,以供人们提取微细结构信息的光学仪器。

    荧光显微镜:荧光显微镜是以紫外线为光源,用以照射被检物体,使之发出荧光,然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

    荧光显微镜与普通光学显微镜的区别

    荧光显微镜的光源主要采用氙弧灯或汞灯,但近年来也使用高功率LED作光源,而普通光学显微镜通常只有卤素或LED灯来照明。荧光显微镜的照明方式一般是用落射式,也就是说光源是通过物镜来投放于试验样本上,而普通光学显微镜是直接用光源照射样品,从而进行的观察。在分辨率上讲,荧光显微镜利用的是紫外线光源,波长比较短,但是分辨率却高于普通的光学显微镜。在滤光片的使用上,荧光显微镜是用了两个特殊的滤光片,在光源前的作用是用来滤出可见光,在物镜和目镜之间的作用是用来滤出紫外线,以保护观察者的眼睛。荧光显微镜与普通光学显微镜的区别大致就是这些。

    光学显微镜一般由载物台、聚光照明系统、物镜,目镜和调焦机构组成。聚光照明系统通过改变照明方式,可以获得亮背景上的暗物点(称亮视场照明)或暗背景上的亮物点(称暗视场照明)等不同的观察方式,以便在不同情况下更好地发现和观察微细结构。

    荧光显微镜与普通光学显微镜的区别就是照明方式、分辨率、滤光片的使用上的不同,通俗来讲,荧光显微镜是普通光学显微镜的一个分支,只是在生物研究中用来细胞中有些物质,如叶绿素等,受紫外线照射后可发荧光;另有一些物质本身虽不能发荧光,但如果用荧光染料或荧光抗体染色后,经紫外线照射亦可发荧光,荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。具体有以下的区别:

    1、在照明方式上看

    荧光显微镜的照明方式一般是用落射式,也就是说光源是通过物镜来投放于试验样本上。

    2、在分辨率上看

    荧光显微镜利用的是紫外线做为光源,波长比较短,但是分辨率却高于普通的光学显微镜。

    3、在滤光片上的不同

    荧光显微镜是用了两个特殊的滤光片,在光源前用是用来滤出可见光,在物镜和目镜之间的使用来滤出紫外线,这样可以保护人的眼睛。

    荧光显微镜也是光学显微镜的一种,主要的区别是二者的激发波长不同。由此决定了荧光显微镜与普通光学显微镜结构和使用方法上的不同。

    荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。

    荧光显微镜工作原理

    多采用200W的超高压汞灯作光源,它是用石英玻璃制作,中间呈球形,内充一定数量的汞,工作时由两个电极间放电,引起水银蒸发,球内气压迅速升高,当水银完全蒸发时,可达50~70个标准大气压力,这一过程一般约需5~15min。超高压汞灯的发光是电极间放电使水银分子不断解离和还原过程中发射光量子的结果。它发射很强的紫外和蓝紫光,足以激发各类荧光物质,因此,为荧光显微镜普遍采用。

    1.激发滤板根据光源和荧光色素的特点,可选用以下三类激发滤板,提供一定波长范围的激发光。

    紫外光激发滤板:此滤板可使400nm以下的紫外光透过,阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5,外加一块BG-38,以除去红色尾波。

    紫外蓝光激发滤板:此滤板可使300~450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3,外加BG-38。

    紫蓝光激发滤板:它可使350~490nm的光通过。常用型号为QB24(BG12)。

    最大吸收峰在500nm以上者的荧光素(如罗达明色素)可用蓝绿滤板(如B-7)激发。


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