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荧光显微镜使用方法|荧光显微镜使用步骤
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北京长恒荣创科技

时间 : 2021-02-24 22:00 浏览量 : 66

    荧光显微镜使用方法

    1、用窗帘遮蔽光线,关闭房间内的电灯,除去荧光显微镜的防尘罩,确保荧光显微镜灯室通风良好、无遮盖。装上汞灯灯箱,并转动灯箱卡圈上的拨杆,将灯箱与镜臂连接。

    2、将汞灯灯箱的电源插头插入荧光电源箱后的插座,再将荧光电源箱的插头插入220V外接电源。

    3、打开荧光显微镜电源开关,电压表显示出电源电压,如电源电压波动不大于额定电压值的5%,即可按下启动开关点燃汞灯,如因天气太冷或电压不稳定等原因,一次启动未点燃汞灯,可以多按几次。待超高压汞灯弧光达到稳定状态并达到Zda发光效率,即可开始工作。

    4、灯泡的使用调中:

    ①任选一块标本放在荧光显微镜载物台上。

    ②转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移出光路,转动滤色片组转换手轮,将紫光(V)或蓝光(B)或绿光(G)激发滤色片组转入光路,并将25荧光物镜转入光路。

    ③调节粗微调手轮,将标本像调焦清晰。

    ④前后推动垂直照明器右边的聚光镜调焦推杆,使视场光栏成像清晰,转动视场光栏拨杆将视场光栏收小,调节视场光栏调中螺钉使视场光栏居中,然后再将视场光栏开至Zda。

    ⑤转动镜臂上的聚光镜旋钮使聚光镜移入光路,前后调节灯箱上的聚光镜拨杆,使汞灯的弧光在视场内成像清晰。

    ⑥调整灯箱上的灯泡水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使汞灯的弧光居中。

    ⑦调整反光镜水平调节螺钉和垂直调节螺钉,使光源的反射像与汞灯的弧光分开。

    ⑧转动聚光镜旋钮把聚光镜移出光路,此时视场照明均匀。

    5、荧光显微镜使用过程中荧光观察:

    ①将荧光染色标本放到荧光显微镜载物台上。

    ②将10x平场物镜或25x荧光物镜转入光路,调节载物台纵横移动手轮,将标本移入光路。

    ③转动滤光片转换拨轮,将荧光染色标本所需要的激发滤光片组转入光路。激发滤光片组编号刻在滤片组转换拨轮上。滤光片选择正确与否,是荧光显微镜能否得到正确应用的关键。选用滤光片时,必须遵守斯托克斯定律:激发滤光片的透射波长<双色束分离器的透射波长<阻断滤光片的透射波长。

    ④调节粗调手轮,当看清荧光图像轮廓后,再用微调手轮调焦,直至看到清晰的荧光图像。

    ⑤当需要得到较强的荧光图像时,可转动聚光镜旋钮把聚光镜移入光路,可获得较明亮的荧光图像。

    ⑥当需要使用40x或100x荧光物镜观察时,应在标本和物镜间加上甘油,油中不能有影响观察的小泡或杂质。使用时可使甘油慢慢浸润一会儿,然后轻轻左右来回转动物镜转换器以排除气泡。

    6、荧光显微摄影

    由于荧光图像一般均较明场观察暗得多,所以进行荧光显微摄影需要较长的曝光时间,在曝光时应注意避免荧光显微镜震动。为了缩短曝光时间,可选择倍率较低的摄影目镜或感光度较高的摄影胶片如ASA200以上或DIN24以上。

    荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要,由于荧光很易褪色减弱,要即时摄影记录结果。方法与普通显微摄影技术基本相同。因紫外光对荧光猝灭作用大,如FITC的标记物,在紫外光下照射30s,荧光亮度降低50%。所以,曝光速度太慢,就不能将荧光图像拍摄下来。一般研究型荧光显微镜都有半自动或全自动显微摄影系统装置。

    7、荧光图像的记录方法

    荧光显微镜所看到的荧光图像,一是具有形态学特征,二是具有荧光的颜色和亮度,在判断结果时,必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标,即凭工作者目力观察。作为一般定性观察,基本上是可靠的。

    8、荧光显微镜使用结束,关闭所有电源,做好镜头和载物台的清洁工作,待灯室冷却至室温后,用防尘罩盖好显微镜,并做好使用记录。

    荧光显微镜使用步骤

    1.关闭房间内的电灯,开启显微镜汞灯;

    2.根据样品标记的荧光素选择相应的滤光片;

    3.放好样品,找到合适的视野;

    4.如需拍照,请确认照相机内已装好彩色胶卷(最好使用27定胶卷);

    5.开启自拍装置,选择手动档,通常拍摄速度在0.5-10秒内;

    6.使用结束,关闭所有电源并做好使用记录。

    荧光显微镜使用注意事项

    1、严格按照荧光显微镜说明书要求进行操作,不要随意改变程序。

    2、荧光显微镜应在暗室中进行检查。进入暗室后,接上电源,点燃超高压汞灯5~15min,待光源发出强光稳定后,眼睛完全适应暗室,再开始观察标本。

    3、防止紫外线对眼睛的损害,在调整光源时应戴上防护眼镜。

    4、检查时间每次以1~2h为宜,超过90min,超高压汞灯发光强度逐渐下降,荧光减弱;标本受紫外线照射3~5min后,荧光也明显减弱;所以,Z多不得超过2~3h。

    5、荧光显微镜光源寿命有限,标本应集中检查,以节省时间,保护光源。天热时,应加电扇散热降温,新换灯泡应从开始就记录使用时间。灯熄灭后欲再用时,须待灯泡充分冷却后才能点燃。一天中应避免数次点燃光源。

    6、标本染色后立即观察,因时间久了荧光会逐渐减弱。若将标本放在聚乙烯塑料袋中保存,可延缓荧光减弱时间,防止封裱剂蒸发。

    7、荧光亮度的判断标准:一般分为四级,即“-”表示无或可见微弱荧光。“+”表示仅能见明确可见的荧光。“++”表示可见有明亮的荧光。“+++”表示可见耀眼的荧光。

    8、其它注意事项、荧光显微镜所看到的荧光图像,一是具有形态学特征,二是具有荧光的颜色和亮度,在判断结果时,必须将二者结合起来综合判断。荧光显微镜摄影技术对于记录荧光图像十分必要,由于荧光很易褪色减弱,要即时摄影记录结果。


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