奥林巴斯显微镜 CX33 观察孢子菌丝生长状态特征的完整指南

一、奥林巴斯 CX33 显微镜的准备与参数设置

1. 显微镜配置基础

光学系统：CX33 采用 UIS2 无限远光学系统，支持明场观察（适合孢子菌丝的常规形态学分析）。

物镜选择：

低倍镜（4×、10×）：用于观察菌丝整体生长分布、菌落边缘形态。

高倍镜（40×）：观察菌丝细节（如隔膜、分支）及孢子着生方式。

油镜（100×）：仅在需要高分辨率观察孢子细微结构时使用（需配合香柏油）。

光源调节：使用内置 LED 光源，通过光阑调节亮度，避免过强光线导致样本失真。

2. 观察模式优化

采用明场（Brightfield）模式，配合载物台移动尺，逐区域扫描样本。

若菌丝颜色较浅，可微调对比度（通过聚光镜高度或光阑孔径）增强结构可见性。

二、孢子菌丝样本的制片与染色方法

1. 临时制片步骤

材料准备：无菌接种环、载玻片、盖玻片、乳酸酚棉蓝染色液（或水）、无菌水。

操作流程：

取少量菌落边缘的菌丝及孢子（避免过度刮取导致结构破坏），置于载玻片中央。

滴加 1 滴乳酸酚棉蓝染色液（可固定样本、防止干燥，并使菌丝细胞壁、孢子着色）。

轻轻覆盖盖玻片，避免气泡产生，用吸水纸吸去多余染液。

2. 染色原理与作用

乳酸酚棉蓝：

乳酸：固定菌丝结构，防止霉变。

酚：杀菌，避免样本污染。

棉蓝：使真菌细胞壁呈蓝色，便于区分菌丝、孢子与背景。

三、孢子菌丝生长状态的特征观察与分析

（一）菌丝的形态学特征

观察维度 典型特征描述

菌丝类型 - 有隔菌丝：多数高等真菌（如霉菌）具横隔膜，分隔成多个细胞，可见细胞核区域。

- 无隔菌丝：低等真菌（如根霉）无隔膜，呈多核管状。

颜色与质地 - 无色透明、浅色（如白色、黄色）或深色（如褐色、黑色），取决于菌种及生长阶段。

- 质地可呈绒毛状、棉絮状或蛛网状。

分支与生长方向 - 分支角度：锐角、直角或不规则分支（如青霉呈扫帚状分支，曲霉呈放射状）。

- 生长方向：向心生长（菌落中心）或辐射状延伸。

特殊结构 - 假根（根霉）、匍匐菌丝（毛霉）、吸器（寄生真菌）等适应性结构。

（二）孢子的形态学特征

观察维度 典型特征描述

孢子类型 - 分生孢子：着生于分生孢子梗顶端（如青霉的帚状分生孢子链、曲霉的顶囊孢子）。

- 孢子囊孢子：生于孢子囊内（如根霉的球形孢子囊）。

- 厚垣孢子：菌丝特化形成的休眠孢子，壁厚、圆形。

形态与大小 - 球形、卵形、椭圆形、针形等，直径通常 2~20 μm（需通过显微镜标尺测量）。

- 表面光滑、粗糙、具刺或纹饰（高倍镜下可见）。

颜色与排列 - 无色、绿色、黑色、橙色等（如青霉孢子呈蓝绿色，曲霉孢子呈黄色或褐色）。

- 单生、成链、成簇或聚集形成孢子头。

着生位置 - 顶生（孢子梗顶端）、侧生（菌丝侧面）或内生（孢子囊内）。

（三）生长动态特征（不同培养阶段）

初期（1~2 天）：菌丝萌发，形成稀疏的芽管，孢子吸水膨胀，颜色较浅。

中期（3~7 天）：菌丝大量分支，形成网状菌落，孢子开始密集产生（如青霉的分生孢子梗明显可见）。

后期（7 天以上）：菌丝老化，部分区域出现色素沉积，孢子成熟脱落，菌落边缘可能出现自溶现象。

四、观察记录与数据分析要点

图像采集：

使用显微镜配套相机或手机通过目镜拍摄，标注放大倍数、培养时间、菌种名称。

建议拍摄低倍镜全景图（显示菌落分布）和高倍镜细节图（显示孢子 / 菌丝结构）。

定量分析：

测量菌丝直径、孢子大小（使用显微镜标尺工具），统计分支密度（单位面积内的分支数）。

记录孢子产生速率（如每天每视野的孢子数量变化）。

对比分析：

比较不同培养条件（温度、湿度、营养基质）下的形态差异，如高温下菌丝是否变粗短，贫瘠培养基中孢子颜色是否加深。

五、注意事项与常见问题解决

污染控制：制片过程需在无菌环境下操作（如超净台），避免杂菌干扰观察。

样本保存：临时玻片宜当天观察，若需长期保存，可使用封片剂（如中性树胶）封片。

显微镜维护：使用油镜后需用擦镜纸蘸取二甲苯擦拭物镜，避免香柏油干涸影响成像。

特征混淆排除：

区分菌丝碎片与完整菌丝（完整菌丝具连续细胞壁，碎片边缘不规则）。

避免将气泡误认为孢子（气泡呈圆形、边缘亮、无内部结构，按压盖玻片会变形）。

六、延伸应用：结合 CX33 的进阶观察技巧

相差观察（需额外配件）：若配备相差环板，可增强无色透明菌丝的对比度，无需染色即可观察活细胞动态。

时间序列观察：固定样本位置，定期拍照，记录菌丝生长速度及孢子形成过程（如曲霉顶囊的发育轨迹）。

通过上述方法，可系统分析孢子菌丝的形态学特征与生长规律，为真菌分类、生理研究或病害诊断提供直观的显微数据支持。